Produção e avaliação catalítica de uma Taq DNA polimerase recombinante como alternativa para aplicações biotecnológicas
Palavras-chave:
Taq Polimerase, Proteínas recombinantes, Expressão Gênica, Biotecnologia, Reação em Cadeia da Polimerase, utonomia científica e técnicaResumo
A Taq DNA polimerase recombinante é uma enzima amplamente utilizada em aplicações de biologia molecular, como a PCR. A pandemia de COVID-19 evidenciou a vulnerabilidade associada à dependência de reagentes críticos importados, incluindo polimerases termoestáveis. Este estudo teve como objetivo desenvolver um protocolo otimizado para expressão heteróloga, purificação e validação funcional de Taq polimerase recombinante, visando a produção local. Células Escherichia coli BL21(DE3) foram transformadas com o plasmídeo pOpenTaq, e diferentes condições de indução com IPTG e temperatura foram testadas para maximizar a expressão. A purificação foi realizada por precipitação térmica e com sulfato de amônio, seguida de cromatografia por exclusão molecular. A atividade enzimática foi avaliada por PCR em ponto final, utilizando diferentes templates de DNA, em comparação com uma Taq polimerase comercial. A expressão ótima foi obtida a 37 °C com 1 mM de IPTG, após 4 horas de indução. A enzima purificada apresentou pureza superior a 90% e desempenho equivalente ao da enzima comercial, incluindo na amplificação de amostras clínicas complexas. O protocolo demonstrou ser eficiente, reprodutível e escalável, configurando-se como uma alternativa viável para a produção nacional de polimerases termoestáveis e outros reagentes estratégicos.
Biografia do Autor
Luna Torres-Hichster, Universidad El Bosque
Laboratorio de Parasitología Molecular, Vicerrectoría de Investigaciones, Universidad El Bosque
Carlos Nieto-Clavijo, Universidad El Bosque
Laboratorio de Parasitología Molecular, Vicerrectoría de Investigaciones, Universidad El Bosque
Liliana Morales, Universidad El Bosque
Laboratorio de Parasitología Molecular, Vicerrectoría de Investigaciones, Universidad El Bosque
Jacqueline Chaparro-Olaya, Universidad El Bosque
Laboratorio de Parasitología Molecular, Vicerrectoría de Investigaciones, Universidad El Bosque
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